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E0001  引子合成

 

訂價:NT$ 13

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   詮智重視每一條顧客訂製的 oligo,我們有嚴謹的 QC 流程以確保 oligo 的品質。
一般 oligo 出貨 QC 包括兩階段,首先是以 denaturing PAGE 確認 oligo 長度大小,
然後抽檢批次合成中一定比例的產品 ( 10~15% ),做 HPLC 純度分析,以確認sample中,
完整全長的 oligo 的比例。( 為什麼需要訂購高純度的oligo?) 詳細分析原理如下述。
 
    詮智的 HPLC 系統為 IP-RP HPLC (ion-pairing reversed-phase HPLC),
管柱藉著吸附在表面上帶正電的 ion-pairing reagent 與 oligo 上帶負電的磷酸根結
而使 oligo 滯留在管柱上,隨後再以疏水性漸增的溶液將 oligo 沖提出來。於 oligo
與管柱的結合力與 oligo 骨架上的磷酸根數目成正比,oligo 的長度愈大,滯留時間愈長
因此而得以分離不同大小的 oligo。流洗液經紫外光偵測器測定在260nm波長的吸光值
,經由層析圖分析主要吸收波佔總吸光值比例得到的數值,就是我們用以量化 oligo 純度
的依據。
 
    圖一為我們的系統對於 oligo 的分析結果。樣品中含有兩個長度只差一個 mer 的
oligo,大小分別是 20 mer 與 21 mer,由層析圖顯示,這套系統可以有效分離這兩條
oligo,在實際產品分析時,能夠將 full-length product 以及合成失敗的短鏈產物分
。藉著這套系統,我們能夠確保顧客得到純度有保障的 oligo。  
 
我們提供以下純度等級選擇
Deprotected
建議使用:一般的PCR 實驗,長度小於 25mer 皆可。
但是不適用於掛有 5'-RE 點位的 primer 設計及需要進一步 cloning 或表現的實驗。
 
Desalt    Desalt Oligo 的純度標準
由於合成儀的效率無法達到 100%,合成產物在未經純化前的純度 (full length 的比例)
會因為每一次的合成效率 (coupling efficiency) 而有不同。舉例來說,合成效率在
98.5%時,20 mer 的 Oligo 純度將達到 (0.985)20,相當於純度為 74%。因此若您的
實驗要求較高純度的 oligo 時,我們建議您訂購進一步純化的 oligo
詮智的要求每一條
出產的 desalted oligo 皆達到合成效率 98.5%,下表列出幾個不同
長度的 oligo 出貨品管標準。
建議使用:PCR、sequencing,Oligo 小於 30 mers 時,使用此等級即可。
 
OPC purification    什麼是 OPC purification?
OPC (Oligonucleotide Purification Catridge) 是利用 hydrophobicity 不同的原理,
來分離 full length oligo 及短鏈的合成 failure 。以提高產品中,完整全長的 Oligo
純度。在合成的最後一個步驟,執行 DMT-on mode ,保留 5'- 端最後一個保護基,這樣
形成的 Oligo ,其 hydrophobicity 會大於沒有在 5'- 端保留 DMT group 的
failure Oligo 來的高,在通過特殊的 OPC column 後,可以使兩者分離出來。
依此方法生產的 Oligo 純度可比 desalted Oligo 提高至少 10% 。
建議使用:PCR、sequencing,Oligo 大於 40 mers 時,我們建議您訂購 OPC 等級
 
HPLC purification
我們的採用 IP-RP HPLC 系統做 HPLC 純化,在 40 mer 以下的解析度可達 1 mer
HPLC-purified oligo 皆須通過 PAGE size check 以及 HPLC 純度 95% 的品管標
準。
建議使用:特殊標定的 Oligo、site-directed mutagenesis、PCR cloning、
gel-shift protein-binding assays。
 
Dual-HPLC purification
純化方式為先做一次 DMT-on HPLC purification,純化後的產物再做一次 RP-HPLC purification,
出貨前需通過嚴格的 PAGE QC 品管以確認純度。
建議使用
:適用於長鏈 (大於 60 mer),且純度要求高的 Oligo。
特別推薦用於 gene construction 以及 RNAi vector design 的實驗設計
 
PAGE purification
建議使用:適用於特別長鏈且純度要求高的 Oligo。
 



         


 

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